TIN2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404636

Panoramica

TINF2 codifica TIN2, un componente centrale del complesso shelterin che protegge le estremità dei telomeri organizzando le interazioni tra TRF1 e TRF2 e coordinando l’accesso della telomerasi con i meccanismi di protezione delle estremità. Attraverso queste funzioni di impalcatura, TIN2 sostiene l’omeostasi della lunghezza dei telomeri, impedisce l’attivazione inappropriata dei segnali di danno al DNA alle estremità dei cromosomi e contribuisce a regolare lo stress associato alla replicazione nelle sequenze telomeriche ripetute. L’alterazione di TINF2 compromette il “capping” telomerico e può attivare risposte al danno del DNA dipendenti da ATM/ATR, collegando la disfunzione dello shelterin all’instabilità genomica. Varianti patogene di TINF2 sono associate a disturbi della biologia dei telomeri caratterizzati da un’accelerata riduzione della lunghezza telomerica e da fenotipi di insufficienza tissutale specifici, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici sul mantenimento dei telomeri.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TIN2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TINF2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TINF2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TINF2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TIN2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TINF2 per lo studio della segnalazione di TIN2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TINF2 critici per la funzione di TIN2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TINF2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TIN2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TIN2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TINF2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TIN2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TIN2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TINF2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TINF2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.