Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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TIM Plasmide Double Nickase (h): sc-416503-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TIM Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TIM Double Nickase Plasmid (h) e il TIM Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TPI1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TIM Antibody (H-11): sc-166785
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TIM Plasmide Double Nickase (h) | sc-416503-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **TPI1** codifica la trioso-fosfato isomerasi (TIM), un enzima glicolitico citosolico che catalizza l’interconversione tra diidrossiacetone fosfato e gliceraldeide-3-fosfato. Questo passaggio sostiene un flusso glicolitico efficiente e collega il metabolismo dei carboidrati alla successiva produzione di ATP, al bilanciamento redox e a vie biosintetiche come la via dei pentoso fosfati. L’attività di TPI1 contribuisce all’omeostasi energetica cellulare e alla riprogrammazione metabolica osservata in stati proliferativi e adattati allo stress, rendendolo rilevante per studi sulle risposte all’ipossia e sul metabolismo centrale del carbonio. La carenza ereditaria di TPI1 è associata ad anemia emolitica e disfunzione neuromuscolare, e un’alterata regolazione della glicolisi che coinvolge TPI1 è spesso oggetto di indagine nella ricerca sul metabolismo del cancro.
TIM Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TPI1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TPI1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TPI1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TPI1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.