Thyroperoxidase Plasmide Double Nickase (h): sc-402102-NIC

Il gene TPO umano codifica la tireoperossidasi, una glicoproteina di membrana contenente eme localizzata sulla superficie apicale delle cellule follicolari tiroidee, che catalizza reazioni chiave di iodazione e di accoppiamento necessarie per la biosintesi degli ormoni tiroidei. Ossidando lo ioduro e promuovendo la formazione di iodotirosine sulla tireoglobulina, la TPO integra un’attività enzimatica redox-dipendente con il processamento ormonogenico all’interfaccia con il colloide tiroideo. La funzione della TPO è strettamente legata alla gestione dello ioduro e alle vie di maturazione della tireoglobulina, contribuendo all’omeostasi endocrina attraverso una produzione ormonale regolata. Un’attività della TPO deregolata o il riconoscimento immunitario della TPO sono associati a disfunzioni tiroidee e rappresentano un punto d’ingresso molecolare per studiare le caratteristiche autoimmuni e metaboliche delle malattie della tiroide.

Thyroperoxidase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TPO nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TPO. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TPO. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TPO interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.