Thrombospondin 1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400436-NIC

THBS1 codifica la trombospondina 1, una glicoproteina matricellulare secreta che modula la comunicazione cellula–matrice e il rimodellamento della matrice extracellulare. La trombospondina 1 regola l'angiogenesi attraverso segnali mediati da recettori, incluse interazioni che influenzano l'attivazione del TGF-β latente, il coinvolgimento delle integrine e le risposte dipendenti da CD47. Contribuisce al controllo dell'adesione, della migrazione e della proliferazione cellulare, nonché della segnalazione infiammatoria, collegando segnali stromali ai programmi di riparazione tissutale. Un'espressione deregolata di THBS1 è stata associata a processi di rimodellamento patologico osservati in ambito oncologico, nelle malattie vascolari e in condizioni fibrotiche e infiammatorie, rendendolo rilevante per studi meccanicistici su fenotipi guidati dal microambiente.

Thrombospondin 1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus THBS1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di THBS1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di THBS1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con THBS1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.