TCTE1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423315

Panoramica

Tcte1 codifica TCTE1, una proteina associata a ciglia e flagelli implicata nell’integrità strutturale e nella motilità dell’assonema. Nel topo, TCTE1 è collegata a processi che regolano l’organizzazione dei microtubuli nel compartimento ciliare, sostenendo un battito coordinato guidato dalla dineina e un trasporto intraflagellare efficiente. Alterazioni dei componenti assonemali possono compromettere la ciliogenesi e la funzione del flagello degli spermatozoi, fornendo collegamenti meccanicistici con fenotipi di infertilità maschile e con vie più ampie legate alle ciliopatie. Come modulo ciliare, TCTE1 è rilevante per studiare come l’architettura dell’assonema si interfacci con programmi di segnalazione cellulare che dipendono da ciglia primarie e motili intatte.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TCTE1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tcte1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tcte1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tcte1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TCTE1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tcte1 per lo studio della segnalazione di TCTE1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tcte1 critici per la funzione di TCTE1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tcte1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TCTE1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TCTE1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tcte1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TCTE1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TCTE1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tcte1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tcte1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.