Tau Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400136-ACT

MAPT umano codifica per la proteina tau associata ai microtubuli, un fattore prevalentemente neuronale che si lega ai microtubuli e li stabilizza per supportare il trasporto assonale, la crescita dei neuriti e l’organizzazione del citoscheletro. La funzione di tau è regolata da modificazioni post-traduzionali, in particolare dalla fosforilazione, che modula l’affinità per i microtubuli e influenza la dinamica del citoscheletro e il traffico intracellulare. La disregolazione dell’espressione di MAPT e dell’omeostasi di tau è collegata a processi neurodegenerativi e all’aggregazione proteica osservata nelle tauopatie, tra cui la malattia di Alzheimer e la demenza frontotemporale. MAPT è quindi ampiamente studiato nelle vie che controllano la stabilità dei microtubuli, l’integrità sinaptica, la proteostasi e le risposte allo stress associate alla neuroinfiammazione.

Tau Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAPT senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Tau Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAPT nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAPT, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Tau. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAPT nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Tau nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Tau nelle cellule tumorali con espressione di MAPT silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.