TAPBPL Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409990-ACT

TAPBPL (proteina simile alla TAP binding protein) è una proteina immunoregolatoria residente nel reticolo endoplasmatico che modula il caricamento dei peptidi e il controllo qualità dei complessi MHC di classe I. Interagendo con i componenti del macchinario di presentazione dell’antigene, TAPBPL contribuisce a determinare il repertorio e la stabilità dei complessi peptide–MHC I sulla superficie cellulare, influenzando il riconoscimento da parte delle cellule T CD8+. La sua attività collega la proteostasi del RE, l’editing dei peptidi e le vie di sorveglianza immunitaria, spesso alterate in contesti di evasione immunitaria. La presentazione dell’antigene deregolata associata alla funzione di TAPBPL è quindi rilevante per studi di immunologia dei tumori, biologia delle infezioni e segnalazione infiammatoria.

TAPBPL Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TAPBPL senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TAPBPL Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TAPBPL nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TAPBPL, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TAPBPL. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TAPBPL nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TAPBPL nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TAPBPL nelle cellule tumorali con espressione di TAPBPL silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.