TAB1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402049-ACT

TAB1 umano (TAK1-binding protein 1) è un fattore adattatore/regolatore che si lega a MAP3K7/TAK1 e facilita la propagazione del segnale dai recettori pro-infiammatori e responsivi allo stress verso cascate chinasiche a valle. Attraverso il suo ruolo nell’attivazione di TAK1, TAB1 contribuisce alla segnalazione NF-κB e MAPK, influenzando programmi trascrizionali che controllano la produzione di citochine, le risposte immunitarie innate, la sopravvivenza cellulare e l’apoptosi. La modulazione delle vie dipendente da TAB1 incide sulle risposte cellulari agli input del recettore del TNF e dei recettori Toll/IL-1, collegandolo a processi associati all’infiammazione e alle risposte allo stress tissutale. La segnalazione TAB1–TAK1 deregolata è stata studiata in contesti quali la biologia delle malattie infiammatorie croniche, l’infiammazione associata ai tumori e altre patologie in cui l’attività NF-κB/MAPK risulta alterata.

TAB1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TAB1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TAB1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TAB1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TAB1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TAB1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TAB1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TAB1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TAB1 nelle cellule tumorali con espressione di TAB1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.