SYND3/SDC3/Syndecan-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423236

Panoramica

Sdc3 codifica la sindecano-3 (SYND3/SDC3), un proteoglicano transmembrana a eparan solfato che organizza, sulla superficie cellulare, i segnali della matrice extracellulare e i gradienti di fattori di crescita. Legandosi a ligandi dipendenti dall’eparan solfato, SDC3 modula la segnalazione delle tirosin-chinasi recettoriali e delle chemochine, influenzando il rimodellamento del citoscheletro, la migrazione cellulare, la crescita dei neuriti e la plasticità sinaptica. Nel topo, Sdc3 è particolarmente espresso nei tessuti neuronali e metabolici e contribuisce a vie che regolano la guida assonale, l’adesione cellula–matrice e la segnalazione infiammatoria. Una funzione deregolata della sindecano-3 è stata associata a processi di neurosviluppo e neuroinfiammazione, nonché a fenotipi di alterato bilancio energetico, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico nella ricerca su SNC e metabolismo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SYND3/SDC3/Syndecan-3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sdc3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sdc3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sdc3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SYND3/SDC3/Syndecan-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sdc3 per lo studio della segnalazione di SYND3/SDC3/Syndecan-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sdc3 critici per la funzione di SYND3/SDC3/Syndecan-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sdc3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SYND3/SDC3/Syndecan-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SYND3/SDC3/Syndecan-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sdc3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SYND3/SDC3/Syndecan-3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SYND3/SDC3/Syndecan-3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sdc3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sdc3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.