SUZ12 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401551-ACT

SUZ12 codifica una componente centrale del Complesso Repressivo Polycomb 2 (PRC2), che coopera con EZH2 ed EED per instaurare e mantenere stati di cromatina repressivi attraverso la metilazione di H3K27. Modulando l’accessibilità della cromatina, SUZ12 contribuisce a programmi stabili di silenziamento trascrizionale che regolano la specificazione di linea cellulare, il controllo del ciclo cellulare e le reti geniche dello sviluppo. Un’alterata attività di PRC2 che coinvolge SUZ12 è stata associata a una regolazione epigenetica compromessa in molteplici contesti oncologici e a fenotipi di neuro-sviluppo, rendendolo un nodo chiave negli studi sul rimodellamento della cromatina e sull’omeostasi trascrizionale. La repressione dipendente da SUZ12 interseca vie che controllano differenziamento, proliferazione e risposte al danno del DNA attraverso effetti estesi sull’espressione genica.

SUZ12 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SUZ12 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SUZ12 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SUZ12 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SUZ12, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SUZ12. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SUZ12 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SUZ12 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SUZ12 nelle cellule tumorali con espressione di SUZ12 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.