SURF-4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-407135-ACT

Il gene umano **SURF4** codifica **SURF-4**, una proteina di membrana multipasso del reticolo endoplasmatico (RE) implicata nell’organizzazione delle fasi iniziali della via secretoria e nella gestione del carico tra RE e Golgi. SURF-4 è stata associata ai processi di esportazione dal RE e di controllo qualità che modellano la proteostasi, influenzando il traffico intracellulare e la disponibilità di proteine secrete e di membrana. Attraverso il suo ruolo all’interfaccia del RE, SURF-4 interseca vie che regolano il trasporto mediato da vescicole, la segnalazione dello stress del RE e l’omeostasi del ripiegamento proteico. Un’alterata regolazione del traffico secretorio e della proteostasi del RE è rilevante per numerosi ambiti della biologia delle malattie, inclusi contesti in cui la secrezione, la presentazione dei recettori o il rimodellamento adattativo allo stress contribuiscono alla disfunzione cellulare.

SURF-4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SURF4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SURF-4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SURF4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SURF4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SURF-4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SURF4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SURF-4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SURF-4 nelle cellule tumorali con espressione di SURF4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.