Superoxide Dismutase 2/SOD2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423070-ACT

Il gene murino *Sod2* codifica l’enzima antiossidante mitocondriale superossido dismutasi 2 (SOD2), che catalizza la conversione dell’anione superossido in perossido di idrogeno e ossigeno, contribuendo a mantenere l’omeostasi redox. Limitando l’accumulo di specie reattive dell’ossigeno (ROS) nella matrice mitocondriale, SOD2 influenza l’integrità della fosforilazione ossidativa, la dinamica mitocondriale e la segnalazione correlata all’apoptosi. L’attività di *Sod2* si intreccia con le reti cellulari di risposta allo stress, inclusi i programmi antiossidanti mediati da NRF2, la segnalazione infiammatoria e le vie di adattamento metabolico. Un’espressione o un’attività di SOD2 deregolate sono ampiamente utilizzate come readout meccanicistico in modelli di disfunzione mitocondriale, neurodegenerazione, stress cardiometabolico e danno tissutale associato all’infiammazione.

Superoxide Dismutase 2/SOD2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Sod2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Superoxide Dismutase 2/SOD2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Sod2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Sod2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Superoxide Dismutase 2/SOD2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Sod2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Superoxide Dismutase 2/SOD2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Superoxide Dismutase 2/SOD2 nelle cellule tumorali con espressione di Sod2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.