SUMO-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-417721-ACT

SUMO1 umano codifica SUMO-1, un modificatore ubiquitina-simile che viene coniugato covalentemente alle proteine bersaglio per regolarne stabilità, localizzazione e interazioni proteina–proteina. La SUMOilazione è centrale per il trasporto nucleare, l’organizzazione della cromatina, il controllo della trascrizione, la segnalazione del danno al DNA e la progressione del ciclo cellulare, coordinando risposte adattative allo stress e la proteostasi. Attraverso una dinamica interazione con ubiquitinazione e fosforilazione, SUMO-1 influenza vie quali la segnalazione NF-κB, i checkpoint mediati da p53 e la riparazione associata alla replicazione. Una SUMOilazione deregolata è stata associata a programmi trascrizionali oncogenici, aggregazione proteica neurodegenerativa e alterata segnalazione immunitaria, rendendo SUMO1 un nodo utile per studi meccanicistici sullo stress cellulare e sul mantenimento del genoma.

SUMO-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SUMO1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SUMO-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SUMO1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SUMO1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SUMO-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SUMO1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SUMO-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SUMO-1 nelle cellule tumorali con espressione di SUMO1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.