STK33 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404127-ACT

STK33 (chinasi serina/treonina 33) è una chinasi proteica umana implicata nella regolazione di reti di segnalazione intracellulari che influenzano la sopravvivenza cellulare, la proliferazione e l’organizzazione del citoscheletro. In quanto presunta chinasi serina/treonina, STK33 è stata studiata nel contesto delle dipendenze di segnalazione oncogenica e delle vie di risposta allo stress, in cui un’attività chinasica alterata può rimodellare i programmi di fosforilazione a valle. Un’espressione o una funzione disregolata di STK33 è stata associata, in sistemi modello, a fenotipi rilevanti per il cancro, inclusi cambiamenti nel controllo della crescita e nella sensibilità all’apoptosi. Queste caratteristiche rendono STK33 un bersaglio utile per studiare il rimodellamento delle vie guidato dalle chinasi e la funzione genica dipendente dal contesto nella ricerca biomedica.

STK33 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di STK33 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

STK33 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus STK33 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione STK33, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di STK33. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus STK33 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da STK33 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via STK33 nelle cellule tumorali con espressione di STK33 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.