Stat5b Plasmide Double Nickase (m): sc-423179-NIC

Stat5b murino (signal transducer and activator of transcription 5B) è un fattore di trascrizione responsivo alle citochine che collega le chinasi JAK associate ai recettori a rapidi cambiamenti nell’espressione genica. In seguito alla fosforilazione, STAT5B dimerizza e trasloca nel nucleo per regolare programmi che controllano lo sviluppo dei linfociti, la differenziazione mieloide, il metabolismo e la segnalazione dei fattori di crescita, con ruoli di rilievo a valle delle citochine della famiglia dell’IL-2 e dell’ormone della crescita. L’attività di Stat5b si intreccia con i circuiti di feedback della via JAK–STAT, con il rimodellamento della cromatina e con il controllo trascrizionale di geni della sopravvivenza e del ciclo cellulare. Una segnalazione STAT5B deregolata è spesso studiata in modelli di squilibrio immunitario, infiammazione e trasformazione ematopoietica, in cui output trascrizionali alterati possono spostare il destino di linea e la capacità proliferativa.

Stat5b Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Stat5b nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Stat5b. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Stat5b. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Stat5b interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.