Stat5a Plasmide KO CRISPR/Cas9 (r): sc-437303

Panoramica

STAT5A (trasduttore di segnale e attivatore della trascrizione 5A) è un fattore di trascrizione citoplasmatico latente, attivato a valle delle chinasi JAK in risposta a citochine e fattori di crescita, tra cui prolattina, ormone della crescita e interleuchine. In seguito alla fosforilazione, Stat5a dimerizza, trasloca nel nucleo e regola programmi genici che controllano proliferazione, differenziamento, sopravvivenza e omeostasi metabolica in diversi tessuti. Nei modelli di ratto, la segnalazione di Stat5a contribuisce alla regolazione delle linee ematopoietiche e a reti trascrizionali sensibili agli ormoni, rendendola rilevante per studi su disregolazione immunitaria, fenotipi legati all’infiammazione e rimodellamento dipendente dagli ormoni. L’alterazione dell’attività di STAT5A è spesso utilizzata per interrogare l’architettura della via JAK/STAT e il cross-talk trascrizionale con la segnalazione MAPK e PI3K.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Stat5a (r) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene in linee cellulari rat. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Stat5a.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di per lo studio della segnalazione di Stat5a, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni critici per la funzione di Stat5a
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Stat5a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r) e dal Stat5a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus . Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Stat5a Plasmide HDR (r) e il plasmide HDR Stat5a (r2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.