Stat3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400027-ACT

STAT3 umano codifica Stat3, un fattore di trascrizione citoplasmatico latente che viene attivato a valle dei recettori per citochine e fattori di crescita tramite la segnalazione JAK/STAT. In seguito alla fosforilazione, Stat3 dimerizza e trasloca nel nucleo per regolare programmi genici che controllano proliferazione, sopravvivenza, differenziamento, infiammazione e funzione delle cellule immunitarie, con un ampio crosstalk con le vie MAPK e PI3K–AKT. L’attività di STAT3 modella le risposte di fase acuta e influenza la transizione epitelio–mesenchimale, la segnalazione angiogenica e l’adattamento metabolico in diversi tipi cellulari. Una segnalazione STAT3 disregolata è associata a fenotipi infiammatori e autoimmuni ed è spesso studiata in contesti di riprogrammazione trascrizionale oncogenica e di segnalazione del microambiente tumorale.

Stat3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di STAT3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Stat3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus STAT3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione STAT3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Stat3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus STAT3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Stat3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Stat3 nelle cellule tumorali con espressione di STAT3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.