SSTR5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404199

Panoramica

Il recettore della somatostatina 5 (SSTR5) è un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) per la somatostatina che si accoppia prevalentemente alle proteine Gi/o per inibire l’attività dell’adenilil ciclasi, ridurre il cAMP intracellulare e modulare la segnalazione dei canali ionici. Attraverso effetti a valle su MAPK/ERK e su altre vie regolate dai GPCR, SSTR5 influenza la secrezione ormonale, la neurotrasmissione e i programmi proliferativi in modo dipendente dal tipo cellulare. Nei tessuti umani, SSTR5 contribuisce alla regolazione endocrina e metabolica, inclusa la modulazione della segnalazione dell’insulina e dell’asse dell’ormone della crescita. Una segnalazione deregolata dei recettori della somatostatina è stata associata ad alterazioni dei fenotipi secretori e del comportamento proliferativo in molteplici contesti rilevanti per la malattia, rendendo SSTR5 un nodo utile per l’analisi delle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SSTR5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SSTR5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SSTR5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SSTR5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SSTR5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SSTR5 per lo studio della segnalazione di SSTR5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SSTR5 critici per la funzione di SSTR5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SSTR5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SSTR5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SSTR5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SSTR5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SSTR5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SSTR5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SSTR5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SSTR5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.