Squalene synthetase Plasmide Double Nickase (h): sc-403845-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Squalene synthetase Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Squalene synthetase Double Nickase Plasmid (h) e il Squalene synthetase Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FDFT1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Squalene synthetase Antibody (A-7): sc-271602
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Squalene synthetase Plasmide Double Nickase (h) | sc-403845-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Squalene synthetase Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403845-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FDFT1 codifica la squalene sintasi, un enzima associato al reticolo endoplasmatico che catalizza il primo passaggio irreversibile della biosintesi degli steroli convertendo due molecole di difosfato di farnesile in squalene. Questa reazione collega la via del mevalonato alla successiva produzione di colesterolo, coordinando la biogenesi delle membrane, l’organizzazione dei lipid raft e la sintesi di metaboliti derivati dagli steroidi. Controllando il flusso verso la sintesi degli steroli, la squalene sintasi influenza l’omeostasi lipidica cellulare e la regolazione a feedback dei programmi trascrizionali sensibili al colesterolo. La disregolazione del metabolismo degli steroli dipendente da FDFT1 è stata studiata in ambiti di biologia metabolica e cardiovascolare, neurobiologia e stati proliferativi in cui l’attività della via del mevalonato risulta alterata.
Squalene synthetase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FDFT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FDFT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FDFT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FDFT1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.