Sp4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402568-ACT

L’SP4 umano codifica il fattore di trascrizione Sp4, un membro della famiglia Sp/KLF che si lega a elementi promotori ricchi in GC per regolare programmi di espressione genica che controllano la differenziazione neuronale, la plasticità sinaptica e la trascrizione dipendente dall’attività. Sp4 contribuisce a processi di controllo della cromatina e della trascrizione che modellano le traiettorie dello sviluppo neurobiologico e l’eccitabilità neuronale, collegandolo a vie che governano la maturazione di assoni e dendriti e la formazione dei circuiti. Alterazioni dell’espressione o della funzione di SP4/Sp4 sono state associate a fenotipi neuropsichiatrici e neurosviluppo, supportandone la rilevanza per lo studio della disregolazione delle reti trascrizionali nel sistema nervoso. Nei modelli cellulari, la modulazione di SP4 può essere utilizzata per interrogare i geni bersaglio a valle e i circuiti di regolazione genica che influenzano stati neuronali e gliali.

Sp4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SP4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sp4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SP4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SP4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sp4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SP4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sp4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sp4 nelle cellule tumorali con espressione di SP4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.