Sox2 Plasmide Double Nickase (m2): sc-423086-NIC-2

Il gene Sox2 del topo codifica il fattore di trascrizione SOX2 della famiglia SRY-box, un regolatore fondamentale della pluripotenza e dell’autorinnovamento che coopera con OCT4 e NANOG per mantenere l’identità delle cellule staminali embrionali, limitando al contempo un impegno prematuro verso specifiche linee di differenziamento. SOX2 si lega a elementi enhancer e promotori per controllare programmi trascrizionali che governano la specificazione del neuroectoderma, il mantenimento delle cellule staminali/progenitrici neurali e le transizioni dello stato della cromatina, integrando segnali come WNT, FGF, BMP e SHH che modellano il patterning dello sviluppo. Una deregolazione dell’espressione o del dosaggio di Sox2 è associata a difetti nelle prime fasi dell’embriogenesi e del neurosviluppo, e reti regolatorie di SOX2 alterate sono spesso studiate nel contesto di stati “stem-like” in biologia del cancro. L’editing genetico di Sox2 nel topo consente di investigare in modo meccanicistico i circuiti trascrizionali, la funzione degli enhancer, le decisioni di destino cellulare e i flussi di lavoro di riprogrammazione in sistemi di modellizzazione dello sviluppo e della malattia.

Sox2 Il plasmide Double Nickase (m2) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Sox2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Sox2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Sox2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Sox2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.