Sox2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423086-ACT

Sox2 codifica un fattore di trascrizione con dominio HMG box (high-mobility group) che agisce come regolatore centrale della pluripotenza e della specificazione di linea nell’embrione murino e nei compartimenti di cellule staminali adulte. SOX2 coopera con OCT4 e NANOG per controllare l’accessibilità della cromatina e i programmi trascrizionali che mantengono l’autorinnovamento, limitando al contempo una differenziazione precoce, con ruoli di rilievo nel mantenimento dei progenitori neurali e nello sviluppo degli organi sensoriali. Partecipa a reti regolatorie geniche dello sviluppo che intersecano le vie di segnalazione Wnt/β-catenina, FGF/ERK, BMP e Notch per coordinare le decisioni di destino cellulare. Un’espressione deregolata di SOX2 è associata ad anomalie dello sviluppo ed è spesso implicata nella “stemness” oncogenica, rendendolo rilevante per modellare in vitro difetti di differenziamento e stati trascrizionali simili a quelli tumorali.

Sox2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Sox2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sox2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Sox2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Sox2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sox2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Sox2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sox2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sox2 nelle cellule tumorali con espressione di Sox2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.