Sox-7 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423091-ACT

Il gene murino Sox7 codifica il fattore di trascrizione Sox-7, membro del sottogruppo F della famiglia SOX, che regola la differenziazione endoteliale, la morfogenesi vascolare e il mantenimento dell’identità cellulare durante lo sviluppo. Sox-7 opera in programmi trascrizionali che si intrecciano con la segnalazione angiogenica e l’omeostasi vascolare, includendo crosstalk con le vie Wnt/β-catenina e con pathway associati a Notch. Un’attività alterata di SOX7 è stata collegata a una deregolazione dell’espressione genica endoteliale e a una formazione anomala dei vasi, rendendolo rilevante per studi sui difetti dello sviluppo e sui meccanismi di malattia associati al sistema vascolare. Oltre ai ruoli nell’endotelio, Sox-7 può influenzare reti regolatorie epitelio–mesenchimali e programmi di specificazione di linea utilizzati per modellare il rimodellamento tissutale.

Sox-7 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Sox7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sox-7 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Sox7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Sox7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sox-7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Sox7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sox-7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sox-7 nelle cellule tumorali con espressione di Sox7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.