Sox-30 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405112-ACT

Il gene umano **SOX30** codifica **Sox-30**, un fattore di trascrizione specifico per sequenza della famiglia **SOX** che regola programmi di espressione genica dello sviluppo, con ruoli di rilievo nella differenziazione delle cellule germinali e nella spermatogenesi. Legandosi a elementi enhancer e promotori, Sox-30 modula reti trascrizionali che coordinano le decisioni sul destino cellulare, l’impegno di linea e il controllo, associato alla cromatina, dell’espressione genica specifica di stadio. Un’espressione deregolata di **SOX30** è stata riportata in diversi contesti tumorali, nei quali un’alterata regolazione trascrizionale dipendente da Sox-30 è associata a cambiamenti nella proliferazione, nell’apoptosi e negli stati di differenziazione cellulare. Queste caratteristiche rendono **SOX30** un nodo utile per studiare i circuiti trascrizionali, il crosstalk tra vie di segnalazione dello sviluppo e i meccanismi che collegano i programmi di differenziazione a fenotipi oncogenici.

Sox-30 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SOX30 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sox-30 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SOX30 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SOX30, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sox-30. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SOX30 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sox-30 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sox-30 nelle cellule tumorali con espressione di SOX30 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.