Sox-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401473-ACT

SOX1 codifica il fattore di trascrizione Sox-1, una proteina che si lega al DNA tramite un dominio HMG (high-mobility group) e che svolge un ruolo centrale nella specificazione precoce del neuroectoderma e nel mantenimento dell’identità dei progenitori neurali. Sox-1 regola programmi trascrizionali che controllano l’impegno del destino cellulare, la tempistica della differenziazione e il patterning del tubo neurale, operando all’interno di reti di segnalazione dello sviluppo più ampie che intersecano le vie Wnt, Notch e Shh. Nella biologia umana, un’alterata espressione di SOX1 e i relativi programmi di linea sono rilevanti per gli studi sulla disregolazione del neurosviluppo e sulla riprogrammazione trascrizionale dipendente dal contesto osservata nei tumori con caratteristiche “stem-like”. Come marcatore e regolatore di linea, SOX1 è ampiamente utilizzato per modellare traiettorie di differenziazione neurale e per analizzare reti di regolazione genica in sistemi di cellule staminali e progenitrici.

Sox-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SOX1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sox-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SOX1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SOX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sox-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SOX1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sox-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sox-1 nelle cellule tumorali con espressione di SOX1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.