Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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SOCS-3 Plasmide di attivazione CRISPR (m2): sc-419666-ACT-2
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SOCS-3 Plasmide di attivazione CRISPR (m2) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- SOCS-3 CRISPR Activation Plasmid (m2) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal SOCS-3 CRISPR Activation Plasmid (m2) e dal SOCS-3 CRISPR Activation Plasmid (m22) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di Socs3. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SOCS-3 Antibody (6A463): sc-73045
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SOCS-3 Plasmide di attivazione CRISPR (m2) | sc-419666-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
Il gene murino Socs3 codifica il soppressore della segnalazione delle citochine 3 (SOCS-3), un regolatore inducibile di retroazione negativa che attenua la segnalazione di citochine e fattori di crescita inibendo l’attività della chinasi JAK e promuovendo, tramite il suo dominio SH2 e il SOCS box, il ricambio mediato dall’ubiquitina dei componenti della cascata di segnalazione. SOCS-3 modula le vie della famiglia di IL-6 e del recettore della leptina, plasmando programmi trascrizionali dipendenti da STAT3 che controllano infiammazione, differenziamento delle cellule immunitarie e omeostasi metabolica. Un’attività deregolata di SOCS-3 è stata associata a stati infiammatori cronici, resistenza all’insulina e contesti di segnalazione legati ai tumori, attraverso un’alterata responsività alle citochine e cambiamenti nella polarizzazione dei macrofagi. L’editing del gene Socs3 in modelli murini supporta studi meccanicistici sulla dinamica dei circuiti JAK/STAT, sulla regolazione trascrizionale guidata dalle citochine e sui contributi specifici dei diversi tipi cellulari ai fenotipi immunitari e metabolici.
SOCS-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (m2) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Socs3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
SOCS-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (m2) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Socs3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Socs3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SOCS-3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Socs3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SOCS-3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SOCS-3 nelle cellule tumorali con espressione di Socs3 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.