SOCS-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400618-ACT

Il gene umano **SOCS1** codifica **SOCS-1**, un regolatore intracellulare negativo chiave della segnalazione dei recettori delle citochine, che limita l’attività della via **JAK/STAT** attraverso il riconoscimento SH2-mediato di motivi di fosfotirosina e l’indirizzamento al sistema **ubiquitina–proteasoma** tramite il suo **SOCS box**. Attenuando la segnalazione a valle di interferoni, interleuchine e altri segnali infiammatori, SOCS-1 contribuisce a mantenere l’omeostasi immunitaria, modula la funzione delle cellule presentanti l’antigene e limita programmi trascrizionali infiammatori eccessivi. Un’espressione o un’attività disregolata di SOCS1 è stata associata ad attivazione immunitaria aberrante e a contesti di segnalazione oncogenica in cui l’attivazione persistente di STAT contribuisce ad alterazioni della proliferazione e della sopravvivenza cellulare. Queste proprietà rendono SOCS-1 un nodo utile per studiare l’inibizione a feedback, la responsività alle citochine e l’adattamento trascrizionale in modelli di biologia immunitaria e del cancro.

SOCS-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SOCS1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SOCS-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SOCS1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SOCS1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SOCS-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SOCS1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SOCS-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SOCS-1 nelle cellule tumorali con espressione di SOCS1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.