SNX17 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403452-ACT

SNX17 (sorting nexin 17) è un adattatore endosomiale contenente un dominio PX che si lega ai fosfoinositidi e riconosce i motivi NPxY per controllare il riciclo endocitico di diverse proteine di membrana. Attraverso interazioni con i complessi Retriever/CCC e con il macchinario di traffico associato al retromero, SNX17 favorisce lo smistamento dei recettori dagli endosomi precoci обратно alla membrana plasmatica, modellando così l’output di segnalazione, l’assorbimento di nutrienti e la comunicazione cellula–matrice. Regolando la disponibilità in superficie di carichi come i membri della famiglia del recettore LDL e le integrine, SNX17 influenza vie legate all’omeostasi lipidica, alla migrazione e all’organizzazione del citoscheletro. Un traffico dipendente da SNX17 deregolato è stato associato ad alterazioni della segnalazione recettoriale ed è stato studiato in contesti che includono fenotipi metabolici, neurobiologia e comportamento cellulare correlato al cancro.

SNX17 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SNX17 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SNX17 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SNX17 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SNX17, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SNX17. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SNX17 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SNX17 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SNX17 nelle cellule tumorali con espressione di SNX17 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.