SMPDL3B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-430315

Übersicht

Smpdl3b kodiert die sphingomyelinphosphodiesterase acid-like 3B (SMPDL3B), eine membranassoziierte Phosphodiesterase, die an der Regulation des Sphingolipid- und Phospholipidstoffwechsels an der Zelloberfläche beteiligt ist. SMPDL3B wurde mit der Modulation der Toll-like-Rezeptor-Signalübertragung, Aktivierungszuständen von Makrophagen und der homöostatischen Kontrolle entzündlicher Antworten in Verbindung gebracht, vermittelt durch Effekte auf die Zusammensetzung von Membranlipiden und die Organisation von Rezeptoren. In der Immun- und Nierenbiologie der Maus wurde eine veränderte SMPDL3B-Aktivität mit Änderungen der angeborenen Immunantwort und der Podozytenfunktion assoziiert, wodurch Lipid-Remodeling mit Gewebeschädigung und Entzündung verknüpft wird. Daher wird Smpdl3b häufig in Signalwegen untersucht, die Lipidsignale, endolysosomalen Transport und Immunzell-Phänotypen an Schnittstellen umfassen, die für entzündliche und metabolische Krankheitsmodelle relevant sind.

Das SMPDL3B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Smpdl3b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Smpdl3b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Smpdl3b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SMPDL3B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Smpdl3b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SMPDL3B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Smpdl3b-Exone abzielen, die für die SMPDL3B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Smpdl3b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SMPDL3B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SMPDL3B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Smpdl3b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SMPDL3B HDR-Plasmid (m) und SMPDL3B HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Smpdl3b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Smpdl3b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.