SMPDL3B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430315

Panoramica

Smpdl3b codifica la sfingomielina fosfodiesterasi acido-simile 3B (SMPDL3B), una fosfodiesterasi associata alla membrana implicata nella regolazione del metabolismo di sfingolipidi e fosfolipidi sulla superficie cellulare. SMPDL3B è stata collegata alla modulazione della segnalazione dei recettori Toll-like, agli stati di attivazione dei macrofagi e al controllo omeostatico delle risposte infiammatorie attraverso effetti sulla composizione lipidica di membrana e sull’organizzazione dei recettori. Nella biologia immunitaria e renale del topo, un’attività alterata di SMPDL3B è stata associata a cambiamenti nella reattività dell’immunità innata e nella funzione dei podociti, collegando il rimodellamento lipidico al danno tissutale e all’infiammazione. Di conseguenza, Smpdl3b è spesso studiato in vie che intersecano la segnalazione lipidica, il traffico endolisosomiale e i fenotipi delle cellule immunitarie rilevanti per modelli di malattie infiammatorie e metaboliche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SMPDL3B (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Smpdl3b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Smpdl3b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Smpdl3b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SMPDL3B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Smpdl3b per lo studio della segnalazione di SMPDL3B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Smpdl3b critici per la funzione di SMPDL3B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Smpdl3b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SMPDL3B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SMPDL3B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Smpdl3b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SMPDL3B Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SMPDL3B (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Smpdl3b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Smpdl3b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.