SMEK1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-412572

Panoramica

PPP4R3A codifica SMEK1, una subunità regolatoria della protein fosfatasi 4 (PP4) che indirizza l’attività fosfatasica verso substrati specifici per modulare la segnalazione dipendente dalla fosforilazione. SMEK1 è stata implicata nel controllo della progressione del ciclo cellulare, nelle risposte al danno al DNA e in processi associati alla cromatina attraverso eventi di defosforilazione mediati da PP4 che plasmano la segnalazione dei checkpoint e la dinamica delle proteine nucleari. Influenzando l’equilibrio tra chinasi e fosfatasi, SMEK1 può incidere su vie legate alla stabilità del genoma, alla proliferazione e alla segnalazione da stress. La disregolazione delle reti regolatorie di PP4, incluse le funzioni associate a PPP4R3A, è rilevante per studi sulla segnalazione oncogenica, sullo stress replicativo e su altri disturbi in cui una fosforilazione aberrante e un riparo del DNA compromesso contribuiscono alla patologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SMEK1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PPP4R3A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PPP4R3A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PPP4R3A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SMEK1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PPP4R3A per lo studio della segnalazione di SMEK1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PPP4R3A critici per la funzione di SMEK1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PPP4R3A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SMEK1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SMEK1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PPP4R3A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SMEK1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SMEK1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PPP4R3A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PPP4R3A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.