SLC35B4 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-413728-LAC

SLC35B4 codifica un trasportatore di zuccheri nucleotidici associato a Golgi/RE che media l’importazione di UDP-xilosio e UDP-N-acetilglucosamina nel lume della via secretoria, supportando la glicosilazione e la biosintesi dei proteoglicani. Controllando la disponibilità di zuccheri attivati per le glicosiltransferasi, SLC35B4 influenza la maturazione dei glicani, l’organizzazione della matrice extracellulare e la segnalazione dei recettori dipendente dai glicani. Alterazioni del trasporto di zuccheri nucleotidici e dei programmi di glicosilazione a valle sono implicate nella disregolazione metabolica e nei cambiamenti associati al cancro relativi ad adesione cellulare, migrazione e riconoscimento immunitario. Di conseguenza, SLC35B4 è studiato in vie che collegano l’omeostasi del Golgi e il metabolismo dei carboidrati al rimodellamento del glicoma di superficie cellulare e a fenotipi rilevanti per la malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale SLC35B4 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SLC35B4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SLC35B4 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SLC35B4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SLC35B4. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SLC35B4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.