SLC12A9 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-408925-ACT

SLC12A9 codifica un membro della famiglia 12 dei trasportatori di soluti (solute carrier) correlati al trasporto di cationi e cloruro, coinvolto nella regolazione dell’omeostasi ionica attraverso le membrane intracellulari e nel determinare l’equilibrio osmotico, il pH e le risposte del volume cellulare. Attraverso effetti sulla gestione del cloruro e dei cationi alcalini, SLC12A9 può influenzare il potenziale di membrana e le vie di segnalazione associate all’adattamento allo stress e alla funzione degli organelli. Un’espressione alterata o processi di trasporto ionico deregolati sono spesso collegati alla fisiologia epiteliale e neuronale, con una rilevanza più ampia per disturbi in cui l’equilibrio elettrolitico e il controllo del volume cellulare risultano compromessi. Di conseguenza, SLC12A9 è di interesse per studi meccanicistici che collegano le reti di trasporto ionico alla regolazione dello stato cellulare nei sistemi umani.

SLC12A9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SLC12A9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SLC12A9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SLC12A9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SLC12A9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SLC12A9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SLC12A9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SLC12A9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SLC12A9 nelle cellule tumorali con espressione di SLC12A9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.