Six1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422956

Panoramica

Six1 (sine oculis homeobox homolog 1) codifica un fattore di trascrizione homeobox che regola la formazione dei pattern embrionali e l’organogenesi nel topo, con ruoli di primo piano nella miogenesi, nella nefrogenesi e nello sviluppo delle placodi sensoriali. SIX1 coordina i programmi di specificazione di linea e proliferazione attraverso reti di controllo trascrizionale che si interfacciano con vie di segnalazione dello sviluppo, incluse interazioni con i co-attivatori EYA e la modulazione di insiemi di geni legati a crescita e differenziamento. Un’espressione o un’attività deregolata di SIX1 è associata a traiettorie di sviluppo aberranti ed è stata studiata nel contesto di anomalie congenite e di programmi trascrizionali oncogenici. Nelle cellule, i circuiti trascrizionali dipendenti da Six1 influenzano la progressione del ciclo cellulare, la migrazione e le transizioni dello stato epitelio-mesenchimale, rilevanti per la biologia dello sviluppo e la modellizzazione di malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Six1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Six1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Six1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Six1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Six1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Six1 per lo studio della segnalazione di Six1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Six1 critici per la funzione di Six1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Six1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Six1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Six1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Six1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Six1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Six1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Six1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Six1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.