Siglec-9 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406675-ACT

SIGLEC9 codifica Siglec-9, una lectina di tipo immunoglobulinico legante l’acido sialico espressa prevalentemente su neutrofili, monociti e su alcuni sottogruppi di cellule NK, dove agisce come recettore inibitorio attenuando l’attivazione cellulare. Attraverso i suoi motivi ITIM citoplasmatici, Siglec-9 recluta fosfatasi come SHP-1/SHP-2 per modulare la segnalazione a valle dei recettori immunitari, influenzando processi quali produzione di citochine, degranulazione, fagocitosi e burst ossidativo. Riconoscendo ligandi sialilati su cellule dell’ospite o su cellule alterate, Siglec-9 contribuisce all’omeostasi immunitaria e alla regolazione dell’infiammazione. Una segnalazione di Siglec-9 deregolata è stata implicata nella soppressione immunitaria patologica e in contesti di infiammazione cronica, sostenendone l’uso come marcatore e nodo meccanicistico negli studi di immunologia e delle interazioni tumore–sistema immunitario.

Siglec-9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SIGLEC9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Siglec-9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SIGLEC9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SIGLEC9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Siglec-9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SIGLEC9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Siglec-9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Siglec-9 nelle cellule tumorali con espressione di SIGLEC9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.