Sialyltransferase 7A Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406723-ACT

ST6GALNAC1 codifica la sialiltransferasi umana 7A, una glicosiltransferasi residente nel Golgi che catalizza la sialilazione α2,6 di residui GalNAc sugli O-glicani, contribuendo a definire i pattern di glicosilazione di tipo mucinico sulla superficie cellulare e nelle proteine secrete. Controllando l’esposizione terminale dell’acido sialico, influisce su processi dipendenti dai glicani, tra cui la stabilità proteica, le interazioni recettore–ligando e la segnalazione mediata da lectine all’interno della via secretoria. Un’alterata attività di ST6GALNAC1 può modificare la composizione dei glicoepitopi sialilati ed è stata associata a cambiamenti nei contesti di adesione cellulare e di riconoscimento immunitario, rendendola rilevante per gli studi sulla glicosilazione associata ai tumori e sui microambienti infiammatori. Questo gene è quindi spesso esaminato in analisi a livello di pathway del rimodellamento della glicosilazione, della differenziazione epiteliale e della comunicazione cellula–matrice.

Sialyltransferase 7A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ST6GALNAC1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sialyltransferase 7A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ST6GALNAC1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ST6GALNAC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sialyltransferase 7A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ST6GALNAC1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sialyltransferase 7A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sialyltransferase 7A nelle cellule tumorali con espressione di ST6GALNAC1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.