Shank2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-431686

Panoramica

Shank2 codifica la proteina 2 contenente un dominio SH3 e ripetizioni multiple di anchirina (SHANK2), un’impalcatura (scaffold) della densità postsinaptica che organizza le sinapsi glutammatergiche collegando i recettori ionotropici e i complessi di adesione alla segnalazione a valle e al citoscheletro di actina. Nei neuroni, SHANK2 contribuisce a coordinare la maturazione sinaptica, la morfogenesi delle spine dendritiche e il rimodellamento dipendente dall’attività attraverso interazioni con le proteine della famiglia PSD-95, i complessi Homer–mGluR e le vie di regolazione dell’actina. L’alterazione dell’impalcatura dipendente da Shank2 può modificare la trasmissione sinaptica eccitatoria e l’omeostasi delle sinapsi, rendendolo un nodo frequentemente studiato nei programmi di connettività e plasticità neuronale. Studi genetici e funzionali hanno associato la perturbazione di SHANK2 a fenotipi del neurosviluppo, supportandone la rilevanza per modellare i meccanismi di disfunzione sinaptica in vivo e in neuroni murini in coltura.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Shank2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Shank2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Shank2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Shank2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Shank2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Shank2 per lo studio della segnalazione di Shank2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Shank2 critici per la funzione di Shank2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Shank2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Shank2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Shank2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Shank2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Shank2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Shank2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Shank2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Shank2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.