SGEF Plasmide Double Nickase (h): sc-409874-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SGEF Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SGEF Double Nickase Plasmid (h) e il SGEF Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ARHGEF26. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SGEF Antibody (E-5): sc-514048
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SGEF Plasmide Double Nickase (h) | sc-409874-NIC | 20 µg | $410.00 |
ARHGEF26 codifica SGEF, un fattore di scambio di nucleotidi della guanina per Rho (GEF) della famiglia Dbl che attiva le GTPasi Rho, con ruoli di rilievo nel rimodellamento del citoscheletro guidato da RhoG e nel traffico di membrana. Attraverso la regolazione della dinamica dell’actina, SGEF influenza l’adesione cellulare, la migrazione e i processi endocitici, collegando segnali a monte a cambiamenti coordinati della forma cellulare e della polarità. La segnalazione Rho dipendente da ARHGEF26 interagisce con vie che controllano le risposte delle cellule infiammatorie e il comportamento della barriera epiteliale, rendendolo pertinente per studi sulla segnalazione immunitaria, le interazioni ospite–patogeno e il rimodellamento tissutale. Un’attivazione deregolata delle GTPasi Rho e un controllo alterato del citoscheletro sono comunemente associati a fenotipi oncogenici e a comportamenti cellulari invasivi, collocando SGEF come nodo meccanicistico per analizzare la biologia delle malattie legata alla motilità.
SGEF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ARHGEF26 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ARHGEF26. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ARHGEF26. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ARHGEF26 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.