Set1B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406129-ACT

SETD1B umano codifica Set1B, una metiltransferasi istonica contenente il dominio SET che catalizza la metilazione di H3K4, associata a cromatina trascrizionalmente attiva. Come componente di complessi simili a COMPASS, Set1B contribuisce a coordinare gli stati della cromatina in prossimità dei promotori, l’inizio della trascrizione e la comunicazione enhancer–promotore, integrandosi in una più ampia regolazione epigenetica e nei programmi di espressione genica dipendenti dall’RNA polimerasi II. L’alterazione della funzione di SETD1B è collegata a una deregolazione del controllo trascrizionale e a modifiche delle reti geniche dello sviluppo, con rilevanza per fenotipi neuroevolutivi e per altri contesti in cui la regolazione genica dipendente dalla cromatina risulta compromessa. Queste caratteristiche rendono SETD1B un locus utile per studiare come la metilazione di H3K4 modelli la specificazione di linea, la funzione neuronale e la trascrizione responsiva agli stimoli.

Set1B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SETD1B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Set1B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SETD1B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SETD1B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Set1B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SETD1B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Set1B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Set1B nelle cellule tumorali con espressione di SETD1B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.