SEC24A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-429522

Panoramica

Sec24a codifica SEC24A, un componente fondamentale del rivestimento COPII che seleziona il carico e guida il trasporto anterogrado dal reticolo endoplasmatico all’apparato di Golgi. Collaborando con SEC23 e interagendo con adattatori del carico, SEC24A contribuisce a regolare il traffico secretorio, la proteostasi del RE e l’omeostasi di membrana, che influenzano la gestione dei lipidi e la composizione dei recettori sulla superficie cellulare. L’alterazione dell’esportazione dipendente da COPII può innescare risposte di stress del RE e modificare la consegna della matrice extracellulare e di molecole di segnalazione, collegando la funzione di SEC24A alle vie che governano il metabolismo e l’omeostasi tissutale. Nel topo, Sec24a è stato utilizzato per indagare come l’impacchettamento selettivo del carico influenzi la biologia sistemica dei lipidi e delle lipoproteine e fenotipi più ampi della via secretoria.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SEC24A (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sec24a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sec24a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sec24a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SEC24A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sec24a per lo studio della segnalazione di SEC24A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sec24a critici per la funzione di SEC24A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sec24a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SEC24A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SEC24A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sec24a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SEC24A Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SEC24A (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sec24a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sec24a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.