SCRG1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-411605-ACT

SCRG1 (scrapie responsive gene 1) codifica una piccola glicoproteina secreta implicata nella segnalazione intercellulare e nella regolazione dei programmi di differenziamento cellulare. Nei tessuti umani e nei sistemi modello, SCRG1 è stato associato alla biologia delle linee mesenchimali e neurali, con ruoli riportati nella modulazione della comunicazione di tipo citochinico, di processi legati alla matrice extracellulare e delle transizioni di stato cellulare. Un’espressione alterata di SCRG1 è stata osservata in contesti di infiammazione, rimodellamento tissutale e fenotipi oncogenici, rendendolo rilevante per studi meccanicistici della segnalazione guidata dal microambiente. Queste caratteristiche supportano l’impiego di SCRG1 come bersaglio per esplorare le vie che controllano differenziamento, migrazione e riprogrammazione trascrizionale.

SCRG1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SCRG1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SCRG1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SCRG1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SCRG1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SCRG1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SCRG1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SCRG1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SCRG1 nelle cellule tumorali con espressione di SCRG1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.