Sc1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-420099-LAC

Nel topo, Sparcl1 codifica Sc1 (SPARC-like 1), una glicoproteina matricellulare secreta che modula l’organizzazione della matrice extracellulare e le interazioni cellula–matrice. Sc1 partecipa alla regolazione dell’adesione e della migrazione cellulare e del rimodellamento tissutale tramite segnali extracellulari che influenzano la dinamica del citoscheletro e il comportamento dello stroma. L’espressione di Sparcl1 è spesso associata ai compartimenti vascolare e stromale ed è studiata in contesti di angiogenesi, riparazione delle ferite e regolazione del microambiente mediata da fibroblasti ed endotelio. Un’attività deregolata di Sparcl1/Sc1 è stata implicata nel rimodellamento patologico e in alterate interazioni tumore–stroma, rendendola rilevante per studi meccanicistici sul controllo del fenotipo cellulare mediato dalla matrice.

Le particelle di attivazione lentivirale Sc1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Sparcl1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Sc1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Sparcl1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Sc1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Sparcl1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.