SART-3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-411332-ACT

Il gene umano **SART3** codifica **SART-3**, una proteina nucleare legante l’RNA implicata nell’assemblaggio e nel riciclo dello spliceosoma, a supporto della dinamica delle snRNP U4/U6 e della fedeltà dello splicing del pre-mRNA. Attraverso i suoi ruoli nel processamento dell’RNA e nell’organizzazione nucleare, SART-3 contribuisce alla regolazione di programmi di espressione genica che influenzano la progressione del ciclo cellulare, le risposte allo stress e la proteostasi. L’alterazione dell’attività dei fattori di splicing e la disregolazione dello spliceosoma sono caratteristiche ricorrenti della biologia tumorale e di fenotipi correlati al sistema immunitario, rendendo SART3 un nodo utile per studiare il rimodellamento del trascrittoma in contesti rilevanti per la malattia. In quanto antigene immunogenico descritto in diverse neoplasie, SART-3 è stato anche impiegato per esplorare i legami tra processamento dell’RNA e presentazione di antigeni associati al tumore, senza implicare un’utilità clinica.

SART-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SART3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SART-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SART3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SART3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SART-3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SART3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SART-3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SART-3 nelle cellule tumorali con espressione di SART3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.