SARM Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403427

Visão geral

A proteína 1 contendo motivos estéreis alfa e TIR (SARM1; SARM) é um adaptador da imunidade inata, enriquecido em axônios, e uma NADase que atua como executora central da degeneração axonal programada. Após lesão neuronal ou estresse metabólico, a ativação de SARM1 promove rápida depleção de NAD+, falha energética e desorganização do citoesqueleto, integrando-se a vias que regulam a homeostase de NMN/NAD, a disfunção mitocondrial, o influxo de cálcio e a sinalização por MAPK. A atividade desregulada de SARM1 tem sido implicada em contextos neurodegenerativos e neuroinflamatórios, incluindo neuropatias periféricas e doenças associadas a axonopatia, nas quais a manutenção axonal e as respostas ao estresse ficam comprometidas. Como um nó de sinalização que conecta a biologia do domínio TIR ao colapso metabólico, SARM1 é amplamente estudada por seus papéis na integridade axonal, na sobrevivência neuronal e na sinalização associada à imunidade inata.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO SARM (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SARM1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SARM1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SARM1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína SARM.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SARM1 para a investigação da sinalização de SARM, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SARM1 críticos para a função SARM
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SARM1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo SARM Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo SARM Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SARM1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo SARM Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR SARM (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SARM1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SARM1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.