SARM Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403427

Panoramica

La proteina Sterile alpha and TIR motif–containing 1 (SARM1; SARM) è un adattatore dell’immunità innata arricchito negli assoni e una NADasi che agisce come principale esecutore della degenerazione assonale programmata. In seguito a lesione neuronale o a stress metabolico, l’attivazione di SARM1 promuove una rapida deplezione di NAD+, un collasso energetico e la disgregazione del citoscheletro, integrandosi con vie che regolano l’omeostasi NMN/NAD, la disfunzione mitocondriale, l’ingresso di calcio e la segnalazione MAPK. Un’attività deregolata di SARM1 è stata implicata in contesti neurodegenerativi e neuroinfiammatori, incluse neuropatie periferiche e patologie legate ad assonopatia, in cui risultano compromessi il mantenimento assonale e le risposte allo stress. In quanto nodo di segnalazione che collega la biologia del dominio TIR al collasso metabolico, SARM1 è ampiamente studiata per il suo ruolo nell’integrità degli assoni, nella sopravvivenza neuronale e nella segnalazione associata all’immunità innata.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SARM (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SARM1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SARM1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SARM1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SARM.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SARM1 per lo studio della segnalazione di SARM, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SARM1 critici per la funzione di SARM
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SARM1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SARM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SARM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SARM1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SARM Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SARM (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SARM1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SARM1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.