SARM CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403427

概要

Sterile alpha and TIR motif–containing 1（SARM1；SARM）は、軸索に豊富に発現する自然免疫アダプター兼NADaseであり、プログラムされた軸索変性の中枢的な実行因子として機能する。神経損傷や代謝ストレスを受けるとSARM1が活性化し、NAD+の急速な枯渇、エネルギー破綻、ならびに細胞骨格の崩壊を促進する。さらに、NMN/NAD恒常性の調節、ミトコンドリア機能障害、カルシウム流入、MAPKシグナル伝達などを制御する経路と統合されて作用する。SARM1活性の異常は、末梢神経障害や軸索障害に関連する疾患など、軸索の維持機構やストレス応答が損なわれる神経変性・神経炎症の文脈において関与が示唆されている。TIRドメイン生物学と代謝破綻をつなぐシグナル伝達の結節点として、SARM1は軸索の健全性、神経細胞の生存、そして自然免疫関連シグナルにおける役割の観点から広く研究されている。

SARM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSARM1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SARM1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SARM1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SARMタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SARMシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SARM1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SARMの機能に不可欠なSARM1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SARM1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SARM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSARM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SARM1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SARM HDRプラスミド（h）および SARM HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSARM1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSARM1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。