Sacsin Plasmide Double Nickase (m): sc-424466-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Sacsin Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Sacsin Double Nickase Plasmid (m) e il Sacsin Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Sacs. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Sacsin Antibody (G-3): sc-515118
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Sacsin Plasmide Double Nickase (m) | sc-424466-NIC | 20 µg | $410.00 |
Mouse Sacs codifica sacsin, un grande co-chaperone citosolico implicato nel controllo di qualità delle proteine e nell’omeostasi del citoscheletro. Sacsin interagisce con le reti di chaperoni Hsp70/Hsp90 ed è associata alla regolazione dei filamenti intermedi, del trasporto assonale e della dinamica mitocondriale, sostenendo la proteostasi neuronale in condizioni di stress. L’alterazione della funzione di sacsin è associata a fenotipi neurodegenerativi caratterizzati da una compromissione della coordinazione motoria e da una vulnerabilità neuronale progressiva, rendendo Sacs un locus utile per modellare le vie dello stress proteotossico e del mantenimento dell’assone.
Sacsin Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Sacs nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Sacs. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Sacs. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Sacs interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.