S-100P Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404366-ACT

Il gene umano **S100P** codifica **S-100P**, una piccola proteina legante il calcio con motivo **EF-hand** che funge da adattatore di segnalazione, collegando i flussi di calcio a cambiamenti nella dinamica del citoscheletro, nel controllo del ciclo cellulare e in programmi trascrizionali responsivi allo stress. È stato riportato che S-100P interagisce con recettori e nodi di segnalazione come **RAGE**, influenzando vie associate a **MAPK** e **NF-κB** che modulano fenotipi di adesione, migrazione e sopravvivenza. Un’espressione deregolata di S100P è stata osservata in molte neoplasie epiteliali ed è spesso studiata come marcatore di progressione tumorale e potenziale metastatico. Inoltre, la biologia di S-100P è rilevante nel rimodellamento tissutale associato all’infiammazione, dove la segnalazione calcio-dipendente interseca segnali della matrice extracellulare e del sistema immunitario.

S-100P Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di S100P senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

S-100P Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus S100P nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione S100P, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di S-100P. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus S100P nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da S-100P nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via S-100P nelle cellule tumorali con espressione di S100P silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.