S-100A5 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-418401-ACT

S100A5 codifica per S-100A5, una proteina legante Ca2+ della famiglia S100 che funge da sensore intracellulare dinamico, collegando i flussi di calcio ai cambiamenti nelle interazioni proteiche e nello stato cellulare. Come altre proteine S100, S-100A5 può influenzare la segnalazione e l’organizzazione del citoscheletro modulando proteine bersaglio in modo dipendente dal calcio, integrando segnali che incidono sulla differenziazione cellulare e sulle risposte allo stress. L’espressione di S100A5 è arricchita nei tessuti neurali ed è stata utilizzata come marcatore degli stati di linea neuronale e gliale, a supporto di studi sui programmi di neurosviluppo e sulla trascrizione dipendente dall’attività. La deregolazione della segnalazione della famiglia S100 è frequentemente oggetto di studio nell’infiammazione e nella biologia del cancro, rendendo S100A5 un nodo utile per esplorare reti regolatorie legate al calcio in contesti rilevanti per la malattia.

S-100A5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di S100A5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

S-100A5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus S100A5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione S100A5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di S-100A5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus S100A5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da S-100A5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via S-100A5 nelle cellule tumorali con espressione di S100A5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.