RIG-I Plasmide Double Nickase (m): sc-432915-NIC

Il gene murino Ddx58 codifica RIG-I, un’elicasi dell’RNA citosolica della famiglia DExD/H-box che funge da recettore di riconoscimento di pattern per specie di RNA virale dotate di estremità 5′-trifosfato e di brevi RNA a doppio filamento. Il legame del ligando innesca l’attivazione conformazionale e la segnalazione tramite MAVS, promuovendo le vie di TBK1/IKKε e IRF3/IRF7, oltre a quella di NF-κB, per attivare programmi genici dell’interferone di tipo I e dell’infiammazione. L’attività di RIG-I modella il crosstalk dell’immunità innata con la presentazione dell’antigene, le reti citochiniche e la restrizione antivirale cellula-intrinseca. Una segnalazione deregolata di Ddx58/RIG-I è implicata in risposte interferoniche aberranti e in fenotipi associati all’infiammazione, a supporto di studi meccanicistici sull’omeostasi immunitaria e sulla biologia delle infezioni in sistemi murini.

RIG-I Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ddx58 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ddx58. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ddx58. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ddx58 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.