RFX4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406366

Panoramica

RFX4 (regulatory factor X 4) è un fattore di trascrizione a elica-alata della famiglia RFX che si lega a elementi promotori simili all’X-box e contribuisce a coordinare programmi di espressione genica specifici del tipo cellulare. Nella biologia umana, RFX4 è fortemente collegato a processi di neurosviluppo, inclusa la regolazione di reti trascrizionali che influenzano la ciliogenesi, lo sviluppo ventricolare e gli stati di differenziamento nel sistema nervoso centrale. Un’attività alterata di RFX4 è stata associata a una compromissione della patterning cerebrale e a fenotipi neuroevolutivi, rendendolo un utile punto di partenza per studiare i circuiti regolatori guidati dai fattori di trascrizione. Poiché le proteine RFX possono intersecarsi con vie che regolano l’accessibilità della cromatina e moduli genici legati alle ciglia, la perturbazione di RFX4 è rilevante per studi meccanicistici sul controllo delle linee neuronali e sui contesti di segnalazione ciliare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RFX4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RFX4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RFX4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RFX4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RFX4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RFX4 per lo studio della segnalazione di RFX4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RFX4 critici per la funzione di RFX4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RFX4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RFX4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RFX4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RFX4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RFX4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RFX4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RFX4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RFX4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.