RecQL5 Plasmide Double Nickase (h): sc-406407-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RecQL5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RecQL5 Double Nickase Plasmid (h) e il RecQL5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RECQL5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RecQL5 Antibody (C-9): sc-515050
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RecQL5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-406407-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RecQL5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406407-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RECQL5 codifica per RecQ helicase family member 5, un’elicasi del DNA che contribuisce a preservare la stabilità del genoma regolando la dinamica della replicazione del DNA e coordinando la riparazione delle lesioni del DNA. RecQL5 interagisce con l’RNA polimerasi II e contribuisce al controllo della ricombinazione associata alla trascrizione, limitando eventi di crossing-over aberranti e conflitti tra replicazione e trascrizione. Grazie ai suoi ruoli nella regolazione della ricombinazione omologa, nel mantenimento delle forche di replicazione e nelle risposte ai segnali di danno al DNA, RECQL5 è spesso studiato in vie che limitano la mutagenesi e i riarrangiamenti cromosomici. Un’alterazione della funzione di RECQL5 è stata associata a un aumento di fenotipi di instabilità genomica, rilevanti per la ricerca meccanicistica sulla suscettibilità al cancro e sui disturbi di mantenimento del genoma.
RecQL5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RECQL5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RECQL5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RECQL5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RECQL5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.