RB1CC1 Double Nickase Plasmid (h): sc-416259-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das RB1CC1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- RB1CC1 Double-Nickase-Plasmid (h) und RB1CC1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RB1CC1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RB1CC1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-416259-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RB1CC1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-416259-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RB1CC1 (auch bekannt als FIP200) kodiert ein großes Gerüstprotein, das über den ULK1–ATG13–RB1CC1‑Komplex die Initiation der Autophagie koordiniert und die Nährstoffsensorik mit der Bildung des Phagophors koppelt. Über die Autophagie hinaus trägt RB1CC1 zur Regulation der Dynamik fokaler Adhäsionen und zur Organisation des Zytoskeletts bei und beeinflusst damit Zellmigration und Überlebenssignale. Eine Störung der RB1CC1‑abhängigen Autophagie wurde mit erhöhter Empfindlichkeit gegenüber zellulärem Stress und veränderter Proteostase in Verbindung gebracht – Prozesse, die häufig in der Neurodegenerations- und Krebsforschung untersucht werden. Als multifunktionaler Knotenpunkt wird RB1CC1 breit hinsichtlich seiner Rollen in der metabolischen Anpassung, der Qualitätskontrolle von Organellen und der Umprogrammierung von Signalnetzwerken erforscht.
RB1CC1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RB1CC1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RB1CC1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RB1CC1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RB1CC1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.